Tối ưu hóa quy trình kĩ thuật pcr phân tích gen gây rối loạn chuyển hóa acid béo

Abstract

Rối loạn chuyển hóa acid béo là nhóm bệnh thiếu hụt các enzym của quá trình β oxi hóa acid béo dẫn tới không sản xuất được năng lượng từ nguồn dự trữ chất béo của cơ thể. Nguyên nhân là do đột biến các gen mã hóa cho các enzym hoặc protein tham gia vào quá trình vận chuyển acid béo chuỗi dài vào ti thể dẫn tới rối loạn quá trình β oxi hóa acid béo. Kỹ thuật sinh học phân tử giải trình tự gen Sanger (Sanger sequencing) hiện đã được ứng dụng để chẩn đoán xác định đột biến gen gây rối loạn chuyển hóa acid béo (SLC22A5, CPT1, SLC25A20, CPT2) do tính chính xác và đặc hiệu cao hơn các phương pháp xét nghiệm hóa sinh truyền thống. Trong giải trình tự gen Sanger, giai đoạn khuếch đại đoạn gen đặc hiệu bằng PCR (Polymerase chain reaction) có yêu cầu khắt khe về nhiệt độ gắn mồi, nồng độ DNA khuôn hay số chu kỳ nhiệt để đảm bảo chất lượng các đoạn gen thu được sau phản ứng. Nghiên cứu này tập trung vào tối ưu hóa bộ mồi đặc hiệu trong phân tích gen SLC22A5, SLC25A20 và CPT2. Kết quả cho thấy nhiệt độ gắn mồi từ 58°C - 60°C với DNA khuôn được tách từ mẫu máu gót chân trên giấy thấm khô có nồng độ từ 0,5 ng/μL là tối ưu cho đa số các exon trong phân tích các gen trên